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分享一下熒光PCR檢測試劑盒具體的操作流程

更新時間:2022-11-17點擊次數:2152
  熒光PCR檢測試劑盒采用熒光PCR技術,通過熒光信號的變化檢測犬線粒體基因的特異性序列。該試劑盒適用于鑒定多種樣本中是否含有犬源性基因成份。作用原理:所謂實時熒光定量PCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
  熒光PCR檢測試劑盒具體的操作流程:
  1.整個檢測過程應嚴格按照本手冊的要求在試劑制備區、樣品處理區和PCR擴增區進行。各區域的實驗服、儀器和耗材應單獨使用,不得混用;實驗中采用了帶濾芯的吸頭;樣品處理區應配備生物安全柜,在其中進行樣品處理;三個區域應配備紫外線消毒裝置。
  2.為避免RNA降解,樣品處理過程應在0-4℃下進行,實驗完成后應立即進行計算機檢測;樣品處理中使用的儀器和耗材應在不含核酶的情況下進行處理。
  3.應為每個實驗設置陰性和陽性對照。
  4.試劑盒中的所有試劑在使用前應在室溫下充分熔化和混合,并應立即離心。
  5.試劑盒中的所有陰性和陽性對照品應轉移到樣品制備區,并在使用前單獨儲存。
  6.為了防止熒光干擾,必須避免徒手直接接觸PCR反應管,并避免PCR反應管上的任何標記。
  7.儀表放大的相關參數應根據本手冊的相關要求進行設置;不同批號的試劑不能混合。
  8.在實驗過程中,產品廢棄物應在丟棄前進行無害化處理。
  熒光PCR檢測試劑盒檢測方法的局限性有什么?
  1、樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關;
  2、樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現假陽性結果;
  3、陽性對照、擴增產物泄漏,會導致假陽性結果;
  4、病原體在流行過程中基因突變、重組,會導致假陰性結果;
  5、不同的提取方法存在提取效率差異,會導致假陰性結果;
  6、試劑運輸,保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降,出現假陰性或定量檢測不準確的結果;
  7、本檢測結果僅供參考,如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。
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