中文名稱：杏仁源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒。

英文名稱：Amygdaline-Derived Material Probe qPCR Kit。

產品及特點：

本試劑盒可用于檢測食品或其他材料中是否有杏仁源性成分。現代食品加工工藝極大改變了食材原有的味道、氣味、色澤、紋理和質地等特性，因此傳統的感官鑒別技術已經無法對食材的真偽進行準確的鑒定。同時部分食材還有致敏性，因此基于基因檢測的快速靈敏的食材來源檢測技術將對食品監管和安全提供 重要的保障。本公司開發了簡單快捷的杏仁源性成分探針法熒光定量PCR 檢測試劑盒，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。

2. 引物和探針經過優化，靈敏性高。

3. 提供陽性對照，便于區分假陰性樣品。

4. 特異性高，引物是根據杏仁源性成分DNA高度保守區設計，不會跟其他物 種的DNA發生交叉反應。

5. 既可用于定性檢測，又可用于定量檢測。用于定量檢測時線性范圍至少為5個數量級。

6. 本產品足夠50次20μL體系的探針法熒光定量PC 反應。

7. 本產品只能用于科研。

規格及成分：

2×Probe qPCR MagicMix ：500μL（紅蓋）

熒光PCR專用模板稀釋液：1mL（綠蓋）

超純水：1mL（白蓋）

杏仁源性成分探針法qPCR引物-探針混合液：150μL（棕色管）

杏仁源性成分探針法qPCR陽性對照(1×10E7 拷貝/μL)：50μL（黃蓋）

使用手冊：1份

運輸及保存：低溫運輸，-20℃保存，保存期限為12個月

自備試劑樣品：DNA

使用方法：

一、稀釋標準曲線樣品（以 10E1-10E6 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。 由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。標記6個離心管，分別為6，5，4，3，2，1。

用帶芯槍頭分別加入45μL熒光PCR專用模板稀釋液，最好用帶芯槍，下同。在6號管中加入5μL 1×10E7拷貝/μL的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6 拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。換槍頭，在5號管中加入5μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所 得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。換槍頭，在4號管中加入5μL 1×10E5 拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E4拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。重復上面的操作直到得到6個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

如果有N個樣品待提取，最好設置N+2個提取，多出的是PC（樣品制備陽性對照）和NC（樣品制備陰性對照）?？梢匀￡栃詫φ盏?000倍稀釋液10μL再加上一定量的水，使總體積與待提取樣品的規定體積一致，以此作為PC。另外用水作為 NC。用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數提取試劑盒兼容。

三、Probe qPCR 反應（20μL 體系，在樣品制備室進行）

如果做定量分析并且只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），6個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做1次重復，則標記N+4 個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），1個用于PCR陽性對照（用第4號管的陽性對照稀釋液做模 板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設 置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后最后加）

蓋上蓋子后上機，按下面參數進行PCR：

四、數據處理

如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸，繪制標準曲線。再以待測樣品的Ct值從標準曲線上推算出樣品核酸濃度的log值，再推算出其濃度。如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照Ct必須大于或等于40。陽性對照必須有熒光對數增長，有典型擴增曲線，Ct值應該小于或等于37。對待測樣品，如果其Ct大于或等于40則為陰性，如果小于或等于37則為陽性。如果在37-40之間，則重復一次。重復實驗的Ct值如果大于或等于40則為陰性，如果小于40，則為陽性。

杏仁源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒僅供科研。