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還原型谷胱/甘肽(GSH)試劑盒

產(chǎn)品簡介

還原型谷胱/甘肽(GSH)試劑盒測定意義:
GSH是細(xì)胞內(nèi)最主要的抗氧化巰基物質(zhì),在抗氧化、蛋白質(zhì)巰基保護(hù)和氨基酸跨膜運(yùn)輸?shù)戎芯哂兄匾饔谩_€原型與氧化型比值(GSH/GSSG)是細(xì)胞氧化還原狀態(tài)的主要動態(tài)指標(biāo)。因此,測定細(xì)胞內(nèi)GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值,能夠很好地反映細(xì)胞所處的氧化還原狀態(tài)。

產(chǎn)品型號:
更新時(shí)間:2025-06-19
廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
訪問量:1325
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還原型谷胱/甘肽(GSH)試劑盒說明書

 微量法100T/96S

 

    意:正式測定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義:

GSH是細(xì)胞內(nèi)最主要的抗氧化巰基物質(zhì),在抗氧化、蛋白質(zhì)巰基保護(hù)和氨基酸跨膜運(yùn)輸?shù)戎芯哂兄匾饔谩_€原型與氧化型比值(GSH/GSSG)是細(xì)胞氧化還原狀態(tài)的主要動態(tài)指標(biāo)。因此,測定細(xì)胞內(nèi)GSHGSSG含量以及GSH/GSSG比值,能夠很好地反映細(xì)胞所處的氧化還原狀態(tài)。

 

測定原理:

DTNBGSH反應(yīng)生成復(fù)合物,在412nm處有特征吸收峰;其吸光度與GSH含量成正比。

 

自備儀器和用品:

低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸餾水。

 

試劑組成和配制:

試劑一:液體×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體×1瓶,4℃保存。

試劑三:液體×1瓶,4℃避光保存。

 

粗酶液提取:

1.        組織:按照組織質(zhì)量(g:試劑一體(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。8000g4離心10min,取上清置冰上待測。

2.        細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后8000g4,離心10min,取上清置于冰上待測。

3.        血清等液體:直接測定。

GSH測定操作:

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長到412 nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑二置于25℃(一般物種)或者37℃(哺乳動物)水浴中保溫30min

3. 空白管:取微量玻璃比色皿或96孔板,依次加入20μL蒸餾水,140μL試劑二,40μL試劑三,混勻靜置2min后測定412 nm吸光度A1

4. 測定管:取微量玻璃比色皿或96孔板,依次加入20μL上清液,140μL試劑二,40μL試劑三,混勻靜置2min后測定412 nm吸光度A2

注意:空白管只需要測定一次。

 

GSH含量計(jì)算公式:

GSH標(biāo)準(zhǔn)曲線公式:y=1.5 xxGSH濃度,μ mol /mLy為吸光值)

a.使用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下

1)按蛋白濃度計(jì)算

 

GSHμ mol/ mg prot=(A2A1) ÷1.5×V÷V×Cpr =0.667×(A2A1) ÷Cpr

2)按樣本質(zhì)量計(jì)算

GSHμ mol/g 鮮重)=(A2A1) ÷1.5×V÷(V÷V樣總×W)=0.667×(A2A1) ÷W

3)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

GSHμ mol /104 cell=(A2A1) ÷1.5×V÷(V÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)=0.667×(A2A1) ÷細(xì)胞數(shù)量

4)按液體體積計(jì)算

GSHμ mol/ mL=(A2A1) ÷1.5×V÷V =0.667×(A2A1)

V反總:反應(yīng)總體積,0.2mLV樣總:上清液總體積,1 mLV樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,20μL=0.02 mLCpr:上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/mLW:樣品質(zhì)量

 

b.使用96孔板測定的計(jì)算公式如下

GSH標(biāo)準(zhǔn)曲線公式:y=0.75xxGSH濃度,μ mol /mLy為吸光值)

1)按蛋白濃度計(jì)算

GSHμ mol/ mg prot=(A2A1) ÷0.75×V÷V÷Cpr =1.334×(A2A1) ÷Cpr

2)按樣本鮮重計(jì)算

GSHμ mol/g 鮮重)=(A2A1) ÷0.75×V÷(V÷V樣總×W)=1.334×(A2A1) ÷W

3)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

GSHμ mol /104 cell=(A2A1) ÷0.75×V÷(V÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)=1.334×(A2A1) ÷細(xì)胞數(shù)量

4)按液體體積計(jì)算

GSHμ mol/ mL=(A2A1) ÷0.75×V反總÷V =1.334×(A2A1)

V樣總:上清液總體積,1mLV樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,20μL=0.02 mLCpr:上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/mLW:樣品質(zhì)量,g

 

注意事項(xiàng):

1.        試劑一中含有蛋白質(zhì)沉淀劑,因此上清液不能用于蛋白濃度測定。

2.        Z低檢出限為0.011mmol/L

還原型谷胱/甘肽(GSH)試劑盒僅供科研!

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